Aula di Holy Rood Palace. Dia mengatakan kota ini memiliki kerusuhan. Seseorang yang tidak dikenalnya di kepala orang banyak - mummers, topeng, penari dengan lonceng, orang-orang dengan tudung hitam - mengancam, meramalkan dan mendesak orang-orang untuk tidak mematuhi ratu. Punggawa Ratu Riccio membenarkan bahwa ia juga mengawasi dari waktu ke waktu ketika orang-orang dengan bersemangat mendengarkan khotbah-khotbah ini. Halaman selanjutnya mengatakan bahwa orang-orang masuk ke kapel ratu sambil berteriak: "Sarang para penganut agama Yahudi!", Bahwa badut Darnley, suami ratu, melompat ke altar dan mulai berpura-pura menjadi khotbah, dan orang-orang menjawabnya dengan mengejek bait. Ratu Mary Stuart putus asa. Dia merasakan kebencian terhadap orang-orang, sebagian besar abdi dalem meninggalkannya; dia bertanya-tanya bagaimana kekristenannya dapat sangat berbeda dari kekristenan masyarakat Skotlandia. Riccio mengusulkan untuk segera menyiapkan keputusan yang menghukum mereka yang bertanggung jawab atas kerusuhan tersebut. Maria menentukan halamannya, halaman itu mengklarifikasi apakah memasukkan nama Heinrich Darnley, suami ratu. Mary ragu-ragu; ia curiga bahwa kerusuhan itu diinspirasikan olehnya - lagipula, kerumunan dipimpin oleh badut raja. Di sini Riccio mengingatkannya bahwa dia adalah ratu; dia seperti matahari, dan dia memiliki hak untuk menghukum dari Tuhan. Dia menuntut untuk segera memanggil petugas jaga untuk mengumumkan dekrit Ratu. Douglas masuk. Maria mengatakan kepadanya untuk membawa kertas itu ke Kanselir Kerajaan, sehingga dia akan cap. Douglas memindai dekrit itu dan melihat bahwa itu tidak memiliki nama raja. Dia bertanya pada ratu tentang hal ini. Riccio bertanggung jawab untuknya. Douglas kehilangan kesabaran. Dia mendesak ratu untuk tidak menggunakan langkah-langkah penindasan berdarah, mengisyaratkan bahwa dia melihat ini sebagai pengaruh Prancis atau Italia. Tapi sang ratu dengan dingin mengingatkannya pada kekuatannya untuk menghilangkan subyek yang tidak menuruti kehendaknya. Pertengkaran meletus antara Riccio dan Douglas, Douglas menantang Riccio untuk berduel dan bersumpah bahwa dia akan membunuh Venetian besok. Sang ratu pergi dan membawa Riccio pergi. Douglas ditinggalkan sendirian, ia sedang mempertimbangkan duel. Morton masuk. Douglas menunjukkan padanya dekrit itu. Morton ragu-ragu: dia takut akan murka raja dan ratu. Tanpa cap, Morton menawar raja. Pada saat ini, Henry terlibat dalam percakapan dengan Nick pelawaknya, yang menggodanya dengan fakta bahwa sang ratu memiliki kekuatan nyata di Skotlandia, dan Henry hanyalah suaminya, bahwa sang ratu memilih yang dekat, misalnya, Riccio pemain harpa Italia ... Pada saat ini, Morton membawa surat keputusan yang disayangkan. Raja marah, dia memutuskan untuk membunuh Riccio. Raja Lindsay memasuki istana, ia memanggil raja untuk berburu dengan elang yang baru diperoleh. Morton menjawab bahwa raja sudah memiliki pekerjaan hari ini. Lindsay dengan sukarela bergabung dengan plot melawan Riccio. Dia benar-benar melarang membunuh Riccio malam ini, karena dia harus membunuhnya besok pagi. Kemudian Henry, mengambil keuntungan dari penundaan itu, mengirim badut ke peramal untuk mengetahui apa lokasi bintang-bintang itu untuk niatnya.
Peramal di laboratoriumnya (dia juga seorang alkemis) berpendapat dengan dirinya sendiri bahwa pengalaman menegaskan kesia-siaan ilmu pengetahuan, tujuan itu, kehendak bintang-bintang mendominasi manusia, membuang yang baik dan yang jahat. Nick masuk, ditaburi dengan kelicikan, sang peramal tidak kalah dengan kecerdasannya. Nick melaporkan bahwa raja mengirimnya untuk menanyakan nasib Riccio dan memberi tahu peramal itu untuk memperkirakan kematian Riccio. Peramal itu menjawab bahwa bintang-bintang akan memberitahunya, bukan manusia, dan pada gilirannya memprediksi kematian badut itu. Dengan itu dia pergi. Halaman ratu yang disebabkan oleh peramal muncul. Page mencintai kekasihnya. Peramal itu mengatakan kepadanya untuk memberi tahu ratu bahwa hari ini pria yang dicintainya akan mati. "Bagaimana, Botwell akan mati hari ini?" - Seru satu halaman. Peramal itu bingung. Dia ada dalam pikiran Riccio dan bergegas halaman untuk memperingatkannya tentang ini. Ditinggal sendirian, sang peramal bertanya-tanya - juga muncul dari bintang-bintang bahwa Botwell entah bagaimana terhubung dengan sang ratu - melalui Mars, Saturnus ... Botwell masuk. Dari monolognya, menjadi jelas bahwa dia tiba-tiba menemukan dirinya berada di rumah seorang peramal. Menyadari dari mana ia dapatkan, Botwell bertanya kepada peramal itu berapa banyak yang tersisa untuk hidup. Orang tua itu menjawab bahwa tiga tahun dan Botwell akan menjadi raja. Botwell mengeluarkan sebotol racun yang dengannya dia ingin bunuh diri, ingin membuangnya - dan ragu-ragu. Memang, dalam suasana intrik istana, senjata apa pun akan berguna. Dia akan pergi.
Halaman memberi tahu ratu bahwa Riccio akan segera hadir. Sang Ratu menantikannya - menurut pendapatnya, dia sendiri yang tetap setia padanya. "Dan Botvel?" - menanyakan halaman. "Siapa Botvel?" - sang ratu tertarik. Sebuah halaman yang mengejutkan memberi tahu Mary bagaimana, saat berperahu, angin kencang memetik bunga mawar dari kepala ratu, sekuntum bunga jatuh ke dalam air. Dan kemudian salah satu anggota istana - Botvel - bergegas ke kapal dan dengan takut mengejar pendayung untuk menangkap mawar dari air. Setelah mendengar cerita itu, Mary mengirim satu halaman untuk berdoa. Dia mengaku kepada Tuhan bahwa dia tidak punya kekuatan lagi untuk menolak cintanya pada Botwell. Sang Ratu tahu bahwa di istana ia dianggap jatuh cinta pada Riccio. Riccio masuk. Mary melaporkan bahaya fana yang mengancamnya dan dengan dingin mengucapkan selamat tinggal padanya, mengarahkannya ke kapal yang akan membawanya ke Roma. Dalam keputusasaan, Riccio mencoba memohon ratu untuk membatalkan keputusan untuk pergi. Sang ratu bersikeras.
Heinrich, Morton, dan Lindsay mengetahui tentang kepergian Riccio yang akan datang dan dengan cepat berunding untuk membunuhnya atau membiarkannya berlayar. Kemudian Douglas muncul dan melaporkan bahwa Riccio telah berlayar. Douglas putus asa, dia merindukan pembalasan berdarah, kehormatan ksatria terluka. Tiba-tiba mereka bertemu sebuah halaman yang membawa ratu catatan dari Riccio - dia tidak pergi dan akan bersamanya di malam hari. Para konspirator mengambil catatan itu.
Maria sedang sibuk menyulam di kamarnya. Riccio, yang datang, menjelaskan kepadanya bahwa dia tidak bisa pergi, karena dia berduel dengan Douglas di pagi hari. Dia mengakui bahwa dia tidak membutuhkan hidup tanpa cintanya. Dia meminta Mary untuk memberinya karangan bunga mawar - dia akan menanam bunga di altar di Roma ... Henry, Douglas dan Dindsay masuk dan membunuh Riccio. Ratu pingsan. Douglas dikejutkan oleh rasa malu dan ngeri - ia secara sukarela pensiun ke pengasingan. Henry khawatir jika ratu akan membencinya. Lindsay membawa raja pergi, berbisik kepadanya tentang perburuan yang akan datang. Queen Botwell diundang oleh Queen. Mary sadar, melihat Botvel dan mengakui cintanya kepadanya. Botvel memaksanya untuk mengakui bahwa dia menginginkan kematian Henry dan memberinya sebotol racun, mengatakan bahwa ini adalah pil tidur. Mary memberi raja "obat" ini, tetapi racunnya meminum badut itu. Namun, tidak ada yang bisa menghentikan intrik pembunuhan - Botwell meledakkan rumah Raja Henry. Di kejauhan, tangisan yang berkembang dari kerumunan terdengar. Kekacauan dengan ratu bersembunyi.
